在做代谢组学分析的时候,经常会听到QC,QC是样本检测过程中必不可少的一部分,可用于考察方法的稳定性和重复性,今天给大家分享一篇QC的科普贴。如有疑问和不足,欢迎留言
    
     QC样本的制备
    
    :
   
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混合 
 
 相同体积
 
 的所有待检测样本,然后按照与待测样本相同的前处理方法来处理QC样本,之后进样进行LC-MS分析。
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样本检测时,通常在检测最开始运行几次QC样本,之后根据样本量的大小在每检测几个样本之后检测一次QC样本。 
     
   
(图片来源:Want E J, Wilson I D, Gika H, et al. Global metabolic profiling procedures for urine using UPLC–MS. Nature protocols, 2010, 5(6): 1005-1018.)
    
     方法学考察
    
    :
   
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方法一: 
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最早使用的一种方法,从QC样本的总离子流图中选择具有代表性的离子峰(覆盖不同的保留时间,不同的强度),在对QC样本进行重复检测之后,计算这些离子的保留时间以及峰面积的相对标准偏差(RSD),用以考察分析方法的稳定性以及重复性。 
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方法二: 
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所有样品检测完之后,收集所有的QC样本的原始数据进行数据预处理,包括(峰提取,排列,归一化等),经过数据过滤(80%规则)之后,计算剩下的峰的峰面积的RSD值。 
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通常如果在 
 
 一个样本中有超过70%的化合物的RSD值小于等于30%
 
 ,则证明该方法有良好的稳定性以及重复性,所得到的数据可靠(也有不同的评价标准,比如要求
 
 LC-MS数据小于20%
 
 ,
 
 GC-MS数据小于30%
 
 等)。
     
   
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图中 
 
 柱形图
 
 表示化合物在不同RSD范围内的
 
 百分比分布
 
 ,
 
 折线图
 
 表示在不同RSD范围的
 
 累计百分比
 
 。
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方法三: 
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原始数据经过数据预处理之后,将 
 
 所有样本(包括QC样本)
 
 进行PCA分析,在得分图中观察QC样本的聚集程度。
     
   
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由于QC样本是 等量混合了所有的被检测样本,理论上QC样本包含了所有样本中的代谢物,因此QC样本理论上会 
 
 分布在原点周围
 
 。
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图中QC样本 
 
 紧密聚集
 
 ,证明方法
 
 稳定,重复性良好
 
 。
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方法四: 
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采用混合标准品作为QC,该QC通常包含 
 
 不同物理化学性质的体内和体外代谢物(使所选择的化合物具有代表性)
 
 。
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检测结束后,计算这些化合物的 
 
 保留时间以及峰面积的RSD
 
 用以对分离分析方法进行评价。
    
     参考文献
    
   
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Want E J, Wilson I D, Gika H, et al. Global metabolic profiling procedures for urine using UPLC–MS. Nature protocols, 2010, 5(6): 1005-1018. 
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Dunn W B, Broadhurst D, Begley P, et al. Procedures for large-scale metabolic profiling of serum and plasma using gas chromatography and liquid chromatography coupled to mass spectrometry. Nature protocols, 2011, 6(7): 1060-1083. 
 
